光度計物理學(xué)的UV法實現(xiàn)

   光度計是一種實用性較強(qiáng)且測試準(zhǔn)確的光學(xué)分析儀器，在平時測試過程原理當(dāng)中需要用到例如UV法來實現(xiàn)一些光度上的測量。光度計的UV法是在280nm波長，直接測試蛋白與測試核酸類似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，*的線性范圍在1.0-1.5 之間。實驗中選擇Warburg 公式顯示樣品濃度時，發(fā)現(xiàn)讀數(shù)“漂移”。這是一個正常的現(xiàn)象。事實上，只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過1%，表明結(jié)果非常穩(wěn)定。


   選擇Warburg 公式，光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應(yīng)的換算方法，將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單，先測試空白液，然后直接測試蛋白質(zhì)。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì)，一般要消除320nm 的“背景”信息，設(shè)定此功能“開”。

   漂移的原因是因為Warburg 公式吸光值換算成濃度，乘以一定的系數(shù)，只要吸光值有少許改變，濃度就會被放大，從而顯得結(jié)果很不穩(wěn)定。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。對于紫外線來說可以之間定量法相對于比色法來說速度會更加快，操作也較為簡便，可以更加容易受到平行物質(zhì)的干擾，例如DNA的干擾就是其中之一，此外敏感度也是一方面因素，要求上來說蛋白的濃度會高一些，所以光度計的UV法是一種光度計中*的一個物理學(xué)技術(shù)。